RBC Bioscience授权ViVaCell生产的HIT Competent Cells,无需热休克直接转化。HIT感受态细胞操作步骤简单,时间短,冻融稳定性好,并具高效转化率。
HIT-DH5α--DH5α感受态细胞
采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制备得到的感受态细胞,用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108,-70℃保存6个月转化效率不发生改变。
基因型: F-,φ80lacZΔM15, Δ(lacZYA-argF)U169, recA1, endA1, hsdR17(r-, m+), phoA, supE44, λ-, thi-1, gyrA96
HIT-DH5α 不需要热刺激和恢复步骤。
DH5α感受态细胞转化效率:1ⅹ108~5ⅹ108 cfu/μg pUC19
DH5α感受态细胞应用:质粒克隆, TA克隆,蓝白斑筛选,筛选重组质粒, cDNA库创建。
HIT 感受态细胞优势:只需使用冰块!
与传统感受态细胞相比:
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无需热刺激
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10min以内完成转化步骤
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真正1步/1管过程
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效率高达 108 cfu/ug 质粒
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增加冻融耐性
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简单的操作过程适合于自动化
操作步骤:
新一代感受态细胞,无需热刺激!
只需10mins简单操作,高效转化!
(1-10 minutes, efficiency=108 cfu/μg)
注意:转化前请准备好冰浴,将平板培养基与涂布玻璃珠干燥预热到37℃
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1) 从-70℃冰箱取出感受态细胞置于冰浴中10~20秒,至解冻1/3。
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2) 加入待转化的DNA(其中DNA 体积不应超过感受态细胞体积的1/10)。漩涡振荡离心管1秒,混匀内容物。
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3) 控制冰浴中静置1-10分钟(建议可以静置5分钟)。
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4) 转移至37℃干燥平板培养基(含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基等)上, 用ViVaCell涂布玻璃珠涂板。
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5)平板置于 37℃培养16-18 小时,观察转化克隆的增长
对于较大质粒(>6 kb)与cDNA库操作步骤:20min冰浴à1min42˚C水浴à 20min冰浴,将有助于提高转化效率。
参考文献
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a Identification and characterization of a novel enzyme related to the synthesis of PUFAs derived from Thraustochytrium aureum ATCC 34304
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b Phenotypic and genetic characterization of Erwinia rhapontici isolated from diseased Asian pear fruit trees
SP Thapa, SY Cho, JH Hur, CK Lim - Phytoparasitica, 2012 - Springer
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c Development of SCAR marker for simultaneous identification of Miscanthus sacchariflorus, M. sinensis and M. x giganteus
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d Enhanced 2, 3-Butanediol Production in Recombinant Klebsiella pneumoniae via Overexpression of Synthesis-Related Genes
KB Rim, JH Park, MK Oh, JW Lee - Journal of Microbiology and …, 2012 - papersearch.net