BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

产品说明

BCA(Bicinchoninic acid)法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。其原理与Lowery方法类似，通过在碱性环境下蛋白质与CU²⁺产生双缩脲反应形成紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值并与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。 

产品特点

●灵敏度高，最小检测蛋白量可达0.2μg。

●速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。

●线性范围广，20～2000μg/ml浓度范围内有较好的线性范围。

●不受大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中5%的SDS，5%的Triton X-100,5%的Tween 20，60，80等。

产品包装

保存条件

室温保存，蛋白标准品（BSA）-20℃保存，有效期12个月。

操作步骤

1.       BSA标准液的制备

(1) 向30mg BSA标准品中加入1.2ml蛋白标准品配制液，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准母液。配制后可立即稀释使用，也可以-20℃长期保存。

(2) 取适量25mg/ml蛋白标准母液，稀释至终浓度为0.5mg/ml。

注：标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的Nacl或PBS进行稀释。 

2.       根据样品数量配置适量的BCA工作液，50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B(50:1) ，充分混匀。（BCA试剂B加入BCA试剂A中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清）

3.       将不同浓度的蛋白标准品（如1，2，4，6，8，12，16μl等）和待测样品分别加入到96孔板，不足25μl的加标准品稀释液补足。同时，设立空白对照孔。

4.       向各孔加入200μl的工作液，振荡30s充分混匀，37℃放置30min。（或60℃放置15min,也可室温放置2～16h，如待测样品浓度较低可适当增加孵育温度或时间）

注：样品与工作液比例为1:8，若样品有限，也可为1:20。

5.       冷却到室温，在酶标仪上的540～595nm波长范围处检测吸光度，其中562nm波长为最佳。根据蛋白标准品的吸光度，绘制标准曲线。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。 

注意事项

1.       使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。

2.       低温或长期保存时，如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。

3.       实验操作规范，提高上样量的精确度。

4.       每次测定都需做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。